"핵공복합체 마커로 믿고 쓸 수 있나"의 답은 염색 패턴과 밴드 위치에 있습니다. 2H10의 실제 데이터를 보고 무엇을 보여주는지 읽어봅니다.
위 그림 1(데이터시트 Fig.4)은 HeLa 세포를 2H10으로 염색한 면역형광입니다. 위 흑백은 항체(mAb), 가운데는 DNA(DAPI), 아래는 병합(항체 초록 + DNA 마젠타)입니다. 항체 신호가 핵 가장자리를 따라 점상으로 늘어선 것이 보입니다 — 이게 핵막에 박힌 핵공복합체(NPC)의 전형적인 패턴입니다. 마젠타(핵) 주변을 초록(항체 신호)이 테두리처럼 감쌉니다. 다만 항체 단독(위) 사진에는 세포질에도 과립상 신호가 보이며, 데이터시트는 이 신호를 따로 설명하지 않습니다.
01약 98 kDa 위치에 밴드 (웨스턴블롯)
Nup98의 예상 크기(약 98 kDa)에 밴드가 옵니다. 다만 전세포추출물에서는 75 kDa 아래부터 37 kDa 부근까지 여러 밴드가 함께 보이고, 37–45 kDa 부근 밴드는 화살촉 밴드보다 진합니다. 데이터시트는 이 밴드들을 설명하지 않습니다. 참고로 데이터시트 Fig.1(HeLa 핵막 분획, IgG 2,000배 희석)에서는 97 kDa 마커 부근에 밴드 하나만 보입니다(실험 조건이 달라 직접 비교는 아닙니다).
02규격
| 제품코드 | 70-310 | 클론 | 2H10 (rat monoclonal) |
|---|---|---|---|
| 아이소타입 | Rat IgG2cκ | 농도 | 1.0 mg/ml |
| 정제 | Protein A 정제 IgG | 완충액 | PBS(−) + 50% glycerol |
| 면역원 | Recombinant GST-human Nup98 (aa 1–466) | 반응성 | 사람·마우스·랫·S. pombe Nup98, S. cerevisiae nucleoporin(Nup116/100/145N/57/49) |
| 응용 | Western blotting · Immunocytochemistry (데이터 그림 있음) · ELISA · Dot blotting (데이터시트 기재, 그림 없음) | ||
| 보관 | −20 ℃ | 용량 | 100 µg |
03배경 — 왜 이 항체가 유용한가
Nup98은 핵공복합체(NPC)의 구성 단백질로 핵-세포질 물질 수송과 RNA 수출에 관여합니다. 반응 종이 사람부터 효모까지 넓어 여러 모델에서 NPC/핵막을 표지하는 데 쓸 수 있습니다. 데이터시트에는 이 항체를 세포질에 주입하면 핵공에 축적되어 내인성 Ran의 핵 국재를 억제한다는 특성도 기재돼 있습니다.
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04고를 때
핵공복합체 마커, Nup98 검출(IF·WB), 여러 종(사람·설치류·분열효모) 실험에 쓸 수 있습니다. 출아효모에서는 GLFG 뉴클레오포린 여러 종이 함께 검출됩니다. 전세포추출물 WB에서는 아래쪽 밴드가 여럿 보입니다. 데이터시트 Fig.1의 핵막 분획에서는 더 단순한 양상이지만 서로 다른 실험이므로, 분획에 따른 개선 여부는 각 실험계에서 확인해야 합니다. 실험 전 자기 시스템에서 한 번 확인하고 시작하십시오.
05이 글의 항체
더랩케미칼 · BioAcademia 정품 · 영문 데이터시트(PDF) 제공.