실험실에서 진짜 부딪히는 것들

시약 시약 선택 lacZ와 파랑/하양 스크리닝 — β-갈락토시다아제 리포터 기초 β-갈락토시다아제가 왜 분자생물학의 대표 리포터인지, X-gal 파란색과 파랑/하양 콜로니 스크리닝의 원리, α-상보성까지. 리포터 실험의 기본을 정리했습니다. 10.01 시약 시약 선택 β-Gal을 발현한 세포만 잡아낸다 — anti-β-Gal 항체 60-060 검증 데이터 IPTG로 유도한 대장균에서만 116 kDa 밴드, β-Gal cDNA를 형질주입한 세포만 형광. anti-β-galactosidase 항체 60-060의 데이터시트 검증 데이터를 그대로 읽었습니다. 10.01 시약 PCR·효소 왜 Taq, 왜 Pfu, 왜 핫스타트 — PCR 중합효소 기초 PCR에 열에 강한 효소가 필요한 이유부터, Taq와 Pfu가 정확도·산물 말단에서 갈리는 지점, 핫스타트가 막아주는 것까지. 중합효소를 고르기 전에 알아야 할 기본을 정리했습니다. 10.01 시약 PCR·효소 SDS-PAGE 단일 밴드, 그리고 2~8 kb 증폭 — Taq 중합효소 02-001 검증 데이터 SDS-PAGE에서 약 94 kDa 단일 밴드, λDNA 2·4·6·8 kb 네 길이 모두 증폭. BioAcademia 02-001 Taq DNA 중합효소의 데이터시트 검증 데이터 두 장을 그대로 읽었습니다. 10.01 시약 시약 선택 핵공복합체(NPC)와 Nup98 — 핵과 세포질을 가르는 문, 기초 핵공복합체(NPC)가 무엇이고 Nup98이 어떤 역할을 하는지, 왜 백혈병 연구에도 등장하는지, 그리고 실험에서 왜 핵공복합체 마커로 쓰는지 기초부터 정리했습니다. 10.01 시약 시약 선택 핵막에 점점이 — anti-Nup98(2H10)이 핵공복합체를 잡는 검증 데이터 핵공복합체 마커로 믿고 쓸 수 있나. anti-Nup98 단클론 2H10의 실제 면역형광(핵공 점상 패턴)·웨스턴(~98 kDa) 데이터를 그대로 보고 읽었습니다. 10.01 시약 시약 선택 GFP는 왜 초록빛이고 왜 실험에 쓰나 — 형광 리포터 기초 해파리에서 온 초록형광단백질(GFP)이 어떻게 빛나고 왜 유전자에 붙여 '리포터'로 쓰는지, 그리고 GFP를 눈으로 직접 보기 어려울 때 왜 anti-GFP 항체가 필요한지 정리했습니다. 09.22 시약 시약 선택 anti-GFP 1A5 염색이 GFP 자체 형광보다 강했다 — 1A5 검증 데이터 항체를 믿을지는 스펙표가 아니라 검증 데이터로 판단합니다. anti-GFP 단클론 1A5의 실제 면역형광·웨스턴 데이터를 그대로 보고 무엇을 보여주는지 읽었습니다. 09.22 시약 시약 선택 WB엔 되는데 IHC엔 안 나오는 항체 — 데이터시트에서 꼭 봐야 할 칸 'anti-○○ 항체'라고 다 같지 않습니다. 클론성·숙주·검증 응용·포맷까지, 사기 전에 데이터시트에서 확인할 칸을 정리했습니다. 09.21 시약 실험 기법 필수 유전자라 녹아웃이 안 될 때 — 단백질을 수십 분 안에 줄이는 AID2 시스템 유전자를 없애는 대신 단백질을 직접, 가역적으로 없애는 방법입니다. 옥신 유도 분해(AID)와 누수를 크게 줄인 AID2의 원리, 그리고 실험에 필요한 유도제·억제제를 정리했습니다. 09.21 장비 장비 관리 면풍속과 풍량, 무엇을 재야 하나 같은 후드에서 두 값이 따로 놉니다. 어느 쪽을 요구받는지에 따라 장비가 달라집니다. 측정 방법과 기록에 남길 것을 정리했습니다. 08.14 장비 실험장비 소음측정기, 정밀급과 보통급은 무엇이 다른가 등급 차이의 핵심은 규격이 허용하는 오차 폭과 주파수·온도 조건입니다. 어떤 측정에 정밀급이 필요한지, 형식승인은 왜 확인해야 하는지 정리했습니다. 08.14 장비 실험장비 적외선 온도계 값이 안 맞을 때 먼저 볼 두 가지 방사율과 거리계수를 모르면 비접촉 온도계는 틀린 값을 줍니다. 광택 금속면이 특히 그렇습니다. 현장에서 확인할 것을 정리했습니다. 08.14 장비 장비 관리 전도도 값이 다른 이유, 셀상수와 온도입니다 같은 물을 재도 값이 다르게 나옵니다. 셀상수 교정과 온도보정을 어떻게 잡는지, 표준액은 무엇을 쓰는지 정리했습니다. 08.13 장비 장비 관리 KOLAS 교정성적서 포함 제품, 따로 사야 하나 같은 모델인데 성적서 포함본이 따로 있는 이유가 있습니다. 성적서 네 가지를 구분하고, 언제 포함본을 고르는 게 유리한지 정리했습니다. 08.13 장비 실험장비 고무경도계, 같은 시료인데 값이 다르게 나온다면 Shore A와 D는 압침이 다르고, 시편 두께와 유지시간이 값을 바꿉니다. 규격을 적지 않으면 나중에 비교가 안 됩니다. 08.13 시약 취급·보관 청색 실리카겔의 파란색, 코발트인지 SDS로 확인하세요 전통적인 청색 지시 실리카겔에는 염화코발트가 들어 있습니다. 코발트 없는 지시약 제품도 있어 SDS 확인이 먼저입니다. 발암성 분류를 받은 물질이라 취급과 폐기 기준이 다릅니다. 대체품과 재생 방법을 정리했습니다. 08.12 시약 시약 선택 무수용매를 사야 할 때와 직접 말려도 되는 때 Extra Dry 제품이 비싼 데는 이유가 있습니다. 직접 건조로 충분한 경우와 사서 써야 하는 경우를 나누고, 개봉 후 관리까지 정리했습니다. 08.12 장비 실험장비 드라이 블록 히터와 항온수조, 어떤 기준으로 고르나 물을 안 쓰니 수조물의 오염·증발 관리가 사라지지만 대신 접촉 면적을 잃습니다. 시료 용기와 온도 범위로 갈라 보는 기준을 정리했습니다. 08.12 시약 취급·보관 pH 표준완충액, 교정이 틀어지면 버퍼 상태부터 확인하세요 따라 쓴 버퍼를 병에 되돌리고 계신가요. 알칼리 버퍼가 왜 변하는지, 어떻게 나눠 쓰고 언제 버려야 하는지 정리했습니다. 08.11 장비 실험장비 수분측정기와 칼피셔, 같은 '수분'이 아닙니다 수분측정기는 날아간 것 전부를 셉니다. 칼피셔는 물만 셉니다. 두 값이 다르게 나오는 이유와 어느 쪽을 써야 하는지 정리했습니다. 08.11 장비 장비 관리 pH 미터 교정, 버퍼 몇 개로 어떻게 해야 하나 기울기 95~105%, 영점 ±30 mV. 숫자보다 중요한 것은 어떤 버퍼를 고르느냐입니다. 교정 순서와 전극 교체 시점을 정리했습니다. 08.11 장비 장비 관리 흄후드 면풍속, 얼마가 나와야 하고 얼마나 자주 보나 관리대상 유해물질용 포위식 후드의 법정 제어풍속은 가스 0.4 m/s, 입자 0.7 m/s입니다. 정풍량 후드는 새시 높이 하나로 이 값이 무너질 수 있습니다. 08.07 장비 실험장비 원심분리 조건, rpm 말고 RCF로 적어야 하는 이유 RCF = 1.118 × 10⁻⁵ × r × rpm². 같은 4,000 rpm도 로터 반경에 따라 힘이 두 배 가까이 차이 납니다. 08.07 시약 취급·보관 폐액 분류, 어디까지 나눠야 하나 할로겐 분리는 기본입니다. 섞으면 위험한 조합과 라벨에 남겨야 할 정보를 정리했습니다. 08.07 시약 취급·보관 조해성 시약, 칭량하는 사이에도 무게가 올라간다 NaOH·CaCl2 같은 시약은 저울 위에서도 흡습합니다. 오차를 줄이는 실무 순서를 정리했습니다. 08.07 시약 취급·보관 몰레큘러시브 3A·4A·5A·13X, 무엇을 골라야 하나 알코올 건조엔 3A입니다. 4A는 알코올까지 흡착할 수 있습니다. 타입별 선택 원리와 재생 조건을 출처와 함께, 단정하지 않고 정리했습니다. 08.06 시약 시약 선택 완충액 만들 때 시약 등급, 어디까지 필요한가 Tris, EDTA, 염 하나에도 등급이 갈립니다. 세포·분자 실험에서 문제가 되는 지점을 짚었습니다. 08.06 시약 분석·소모품 LC-MS 등급 용매와 첨가제, 등급이 결과를 가른다 포름산 하나만 바꿔도 배경 신호가 달라집니다. LC-MS에서 등급을 따져야 하는 이유를 정리했습니다. 08.06 장비 장비 관리 초순수 장치 카트리지, 언제 갈아야 하나 저항값만 보고 판단하면 늦습니다. TOC, 유량, 사용 이력까지 함께 보는 교체 기준을 정리했습니다. 08.06 장비 분석·소모품 HPLC 바이알과 캡, 자동샘플러에서 문제 안 생기게 바이알 규격, 셉타 재질, 인서트 선택까지. 니들 막힘과 증발로 데이터가 흔들리는 원인을 짚었습니다. 08.06 장비 분석·소모품 시린지 필터, 재질과 공극을 어떻게 고르나 PTFE·PVDF·나일론·PES 중 무엇을 쓸지, 0.22와 0.45는 언제 갈리는지 실무 기준으로 정리했습니다. 08.06 장비 실험장비 건조기와 진공건조기, 어떤 기준으로 고르나 온도만 보고 고르면 시료가 상합니다. 열에 약한 시료, 용매 제거, 처리량 기준으로 선택 기준을 정리했습니다. 08.06 장비 장비 관리 실험실 저울 검교정, 법정검사·KOLAS 교정·자체점검 구분하기 저울의 정기검사 대상 여부는 용도(상거래용)와 함께 저울 종류·최대용량으로 정해집니다. 교정은 KOLAS만 하는 것이 아니고, 성적서에 유효기간도 없습니다. 실무에서 헷갈리는 지점을 정리했습니다. 08.06 시약 취급·보관 THF 과산화물, 언제 확인하고 어떻게 버리나 에테르계 용매는 보관 중 과산화물이 쌓입니다. 개봉일 관리부터 폐기 판단까지 실무 기준을 정리했습니다. 08.06 시약 시약 선택 아세톤 등급, GR·EP·HPLC 무엇을 기준으로 고르나 같은 아세톤인데 등급이 여럿입니다. 용도에 따라 어디까지 필요한지, 어디서부터는 과한지 정리했습니다. 08.06