"이 효소 믿어도 되나"의 답은 스펙표가 아니라 검증 데이터에 있습니다. 02-001 데이터시트의 그림 두 장을 그대로 보고, 각각이 무엇을 보여주는지 읽어보겠습니다.
위 그림 1은 정제한 효소를 SDS-PAGE로 전개하고 CBB(쿠마시 블루)로 염색한 것입니다. 분자량 마커의 75~100 kDa 사이에 단일 밴드 하나만 나타나며, 이 위치가 Taq 중합효소의 예상 분자량 약 94 kDa과 맞습니다. 다른 높이에 흐린 밴드가 없다는 것이 중요합니다. 데이터시트는 이 겔을 근거로 순도 95% 이상을 명시하고, 이와 별도로 오염 엔도뉴클레아제·엑소뉴클레아제가 없음을 확인했다고 적습니다(시험법은 데이터시트에 나와 있지 않습니다). 오염된 뉴클레아제는 주형·산물 DNA를 분해할 수 있으므로, 순도와 뉴클레아제 부재는 PCR용 효소의 중요한 품질 지표입니다(증폭 성능은 그림 2에서 따로 봅니다).
012·4·6·8 kb, 네 길이가 모두 증폭됐다
그림 2는 같은 주형(λDNA)을 목표 길이만 달리해 증폭한 결과입니다. 레인 1~4가 각각 2·4·6·8 kb 산물이고, 네 길이 모두 예상 크기에서 밴드가 뜹니다. 주 밴드가 또렷하고 다른 크기의 뚜렷한 비특이 밴드는 보이지 않습니다(레인 2~4 밴드 위쪽으로 옅은 끌림은 있습니다). 데이터시트는 이 결과를 "양호한 증폭"으로 기록합니다. 데이터시트가 시험한 범위(λDNA 주형, 2·4·6·8 kb)에서는 한 효소로 모두 증폭됐습니다. 콜로니 PCR은 데이터시트가 별도로 든 용도이며, 이 그림이 직접 보여주는 결과는 아닙니다.
02규격
| 제품코드 | 02-001 (200 U) · 02-001-5 (200 U × 5) | 농도 | 5 U/µl |
|---|---|---|---|
| 유래 | Thermus aquaticus 유래, E. coli 재조합 발현 | 분자량 | 약 94 kDa |
| 순도 | SDS-PAGE 95% 이상 (CBB) | 뉴클레아제 | 오염 엔도·엑소뉴클레아제 불검출 |
| 구성 | Taq 중합효소(5 U/µl) · 10× 표준 완충액(Tris-HCl pH 8.3 · KCl · MgCl₂) · dNTP 믹스(각 2.5 mM) | ||
| 활성 정의 | 활성화 연어 정자 DNA(salmon sperm DNA)를 주형으로 74℃에서 30분간 총 dNTP 10 nmol을 산불용성 물질에 도입하는 효소량 = 1 U | ||
| 보관 | −20℃ | 용도 | 연구용 (RUO) |
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03어떤 반응에 쓰나
- 고처리량(High-throughput) PCR — 효소·10× 표준 완충액·dNTP 믹스가 각각 별도 튜브로 들어 있어, 이를 반응액에 넣고 주형·프라이머·멸균수를 더하면 됩니다.
- 콜로니 PCR — 형질전환 콜로니를 직접 주형으로 삼아 삽입 여부를 스크리닝.
- 평활말단 3' 끝 A 부가 — 평활말단 DNA의 3' 끝에 아데노신 하나를 붙여(A-tailing) TA 벡터 클로닝으로 이어갑니다.
- 변형·표지 뉴클레오타이드 도입·프라이머 연장 — dUTP·dITP·형광표지 뉴클레오타이드 도입, 프라이머 연장.
같은 계열에서 고를 때 — dNTP를 따로 넣는 실험이면 dNTP 없는 02-011, GC가 높아 까다로운 주형이면 인핸서가 든 02-003, 교정 활성으로 정확도가 필요하면 02-021 Pfu가 대안입니다. 정확도가 왜 갈리는지는 기초편에서 다룹니다.
04이 글의 제품
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